NP-40 LYSIS BUFFER 裂解液

【產(chǎn)品規(guī)格】 ：100ml /500ml

【儲(chǔ)存條件】 ：-20℃

【有效期】 ：12個(gè)月

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】 ：

NP-40 裂解液是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液。NP-40 裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和 ELISA 等?？梢杂糜趧?dòng)物、植物的細(xì)胞或組織樣品，也可以用于真菌或細(xì)菌樣品。

NP-40 裂解液的主要成分為 Tris(pH7.4)，NaCl，1% NP-40，EDTA 以及磷酸酶抑制劑。此外，本產(chǎn)品還贈(zèng)送一支 PMSF，可以有效抑制蛋白降解。

用 NP-40 裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用 Bradford 法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途！

【操作步驟】(僅供參考)：

1. 對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品：

(1) 融解 NP-40 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1mM，或者根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入適當(dāng)?shù)牡鞍酌噶姿崦敢种苿┗旌衔铩?/span>

(2) 對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸動(dòng)物細(xì)胞 1-2 秒后，細(xì)胞就會(huì)被裂解。植物細(xì)胞宜在冰上裂解 2-10min。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，輕輕 vortex 或者彈擊管底以把細(xì)胞盡量分散開。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管，然后再裂解。

對(duì)于細(xì)菌或酵母：對(duì)于 1mL 菌液或酵母液，離心去上清，如果有必要可以使用 PBS 洗滌一次，充分去除液體后，輕輕 vortex 或者彈擊管底以把細(xì)菌或酵母盡量彈散。加入 100-200 微升裂解液，輕輕 vortex 或者彈擊管底以混勻，冰上裂解 2-10min。如果希望獲得更好的裂解效果，細(xì)菌和酵母可以分別使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液進(jìn)行裂解。

裂解液用量說明：通常 6 孔板每孔細(xì)胞或者 1mL 的菌液或酵母液中的細(xì)菌和酵母量加入 150微升裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。每 100 萬動(dòng)物細(xì)胞用 100 微升本產(chǎn)品裂解后獲得的上清，其蛋白濃度約為 2-4mg/ml，不同細(xì)胞有所不同。

(3) 充分裂解后，10000-14000 g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

2. 對(duì)于組織樣品：

(1) 把組織剪切成細(xì)小的碎片。

(2) 融解 NP-40 裂解液，混勻。取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的最終濃度為 1 mM，或者根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加入適當(dāng)?shù)牡鞍酌噶姿崦敢种苿┗旌衔铩?/span>

(3) 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)

(4) 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。也可以把組織樣品冷凍后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液進(jìn)行裂解。

(5) 充分裂解后，10000-14000 g 離心 3-5 分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

(6) 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器或研磨設(shè)備，缺點(diǎn)是不如勻漿或研磨那樣裂解得比較充分。

【注意事項(xiàng)】 ：

1. 為取得的使用效果，盡量避免過多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。

2. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或 4℃ 進(jìn)行。

3. 對(duì)于某些難溶解蛋白的 Western，如果發(fā)現(xiàn) Western 及 IP 細(xì)胞裂解液 效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液例如 RIPA 裂解液或 SDS 裂解液。

4. 如果發(fā)現(xiàn) IP 的時(shí)候背景很高，即非特異的蛋白也被 IP 下來，則需要選用裂解強(qiáng)度較高的裂解液，例如高效 RIPA 裂解液(EX6010)。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被 IP 下來，則說明裂解液的強(qiáng)度過強(qiáng)，可以使用較為溫和的裂解液例如普通 RIPA 裂解液（EX6020）或 NP-40 裂解液（EX6035）。

5. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

6. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

NP-40 LYSIS BUFFER 裂解液