簡介：Western blot（免疫印跡實驗）實驗服務(wù)
提供商：信帆生物科技有限公司
服務(wù)名稱：Western blot實驗服務(wù)
| 服務(wù)名稱 | 標本要求 | 實驗周期 | 單位 |
| WB（普通蛋白） | 組織、蛋白、細胞 | 2周內(nèi) | 每張膜 |
Western blot簡介
蛋白質(zhì)印記又稱免疫印記，根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測樣品中的某種蛋白的方法。它是利用特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。
Western blot的原理
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。
以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達。
Western blot樣本要求
客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品， 檢測目的蛋白的一抗（或由本公司代購）。樣品要求為：
1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。
2、細胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。
3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。
Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供
內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實驗報告，包括整個試驗流程所涉及的實驗數(shù)據(jù)和實驗步驟。如需進行蛋白純化服務(wù)，將提供檢測報告
Western blot實驗服務(wù)
服務(wù)內(nèi)容
我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務(wù)，如需要還可進行灰度分析。
說明
1、建議提供目的蛋白陽性表達樣品（純蛋白或有陽性表達的細胞或組織）作為陽性對照。
2、每張膜檢測1-8個樣品。
3、如果一抗由客戶提供，請在正確條件下保存，避免污染及反復(fù)凍融。
關(guān)于Western blot實驗異常分析
『無信號』
| 原因 | 建議 |
| 一抗與二抗不匹配 | 選擇針對一抗來源種屬制備的二抗； |
| 一抗不識別目的的種屬的蛋白 | 1)檢查抗體的說明書，適用范圍內(nèi)是否包含目的種屬 |
| 一抗或二抗不足，沒有足夠的抗體結(jié)合到目的蛋白 | 1)降低抗體稀釋倍數(shù)，增加抗體濃度 |
| 封閉劑與一抗有交叉反應(yīng) | 改變封閉劑 |
| 抗原不足 | 1)每個泳道加入20-30ug總蛋白 |
| 在檢測的組織內(nèi)目的蛋白表達水平低 | 檢測樣本不表達目的蛋白選擇表達量高的細胞作為陽性對照，用于確定檢測樣本是否為陰性，也可更換細胞系 |
| 蛋白轉(zhuǎn)膜效率低 | 1)利用麗春紅檢測轉(zhuǎn)膜效率;檢查轉(zhuǎn)移裝置是否電極弄反 |
| 膜過渡洗滌 | 減少洗滌時間和強度 |
| 疊氮鈉抑制二抗活性 | 二抗稀釋液內(nèi)不用疊氮鈉 |
『沒有特異條帶』
| 原因 | 建議 |
| 細胞系傳代過多后蛋白表達譜發(fā)送變化 | 1)使用未傳代或傳代次數(shù)較少的細胞系進行樣品制備 |
| 蛋白本身有很多修飾 | 1)查閱文獻，確定目的蛋白是否存在多種修飾 |
| 蛋白被消化或者降解 | 1)蛋白樣品確保未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑 |
| 所檢測蛋白存在多種剪接體，導(dǎo)致分子量大小不同 | 1)查閱文獻或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA |
| 一抗或二抗?jié)舛雀?/span> | 1)減低抗體濃度 |
| 洗滌不夠 | 1)充分洗滌 |
『條帶大小不正確』
| 原因 | 建議 |
| 目的蛋白被降解 | 確保蛋白樣品未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑 |
| 存在不同的剪接體 | 查閱文獻或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA |
| 重組蛋白 | 檢測是否存在額外加入的蛋白 |
| 特殊蛋白如MDM2等 | 仔細閱讀抗體說明書 |
尊敬的客戶：
本公司有放射免疫技術(shù)服務(wù)、蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)、免疫組化、PCR技術(shù)服務(wù)、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析等，如果您想了解Western blot的更多內(nèi)容或者其他服務(wù)信息，您可以本公司的了解更多產(chǎn)品的詳細信息，至善至美的服務(wù)是我們永無止境的追求，歡迎新老客戶放心選購自己心儀產(chǎn)品，我們將竭誠為您服務(wù)！
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