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Percoll分離液的配置與使用方法

Percoll分離液是一種經(jīng)過聚乙烯吡咯烷酮處理過的硅膠顆粒，經(jīng)過高速離心后可形成連續(xù)密度梯度，由于Percoll擴散常數(shù)低，所形成的梯度十分穩(wěn)定。Percoll分離液采用預(yù)先形成的密度梯度時可在低離心力(200～1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達到滿意的細胞分離結(jié)果。此外，Percoll分離液不穿透生物膜，對細胞無毒害，因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒，還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。Percoll常用于分離和傳話植物原生質(zhì)體、核、葉綠體、和線粒體。

適合分離細胞，亞細胞成分和大病毒(>70S)，滲透壓均勻，粘度低，可調(diào)至生理離子強度和pH，分離條件溫和，對細胞無毒性，可以滅菌消毒。

Percoll分離液的配置與使用

1、不同濃度(密度)Percoll分離液的制備: 先用9份Percoll分離液與1份8.5％ NaCl混合達到生理性滲透壓，然后用生理溶液(0.85％ NaCl)稀釋到所需濃度。

2、不連續(xù)密度梯度Percoll層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤，除去多余血清，這種預(yù)處理可使逐層疊加的Percoll液平穩(wěn)沿管壁流下，使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置，有時相鄰兩層Percoll比重相差不大時，可將Percoll液放入注射器中，小針頭斜面緊貼管壁，任其自然慢慢流下。

3、裝樣：樣品體積和細胞濃度根據(jù)不同細胞而異，一般加樣體積不宜過大，細胞濃度也不可過高，否則會影響細胞的分離和回收。

4、離心：一般采用離心力為400g，時間20～25min。由于多層Percoll之間密度差別不大，因此離心機加速、降速時要慢，要平穩(wěn)。

5、取樣：當(dāng)所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時，可逐層去除Percoll液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于Percoll層中,則需要逐層收集。收獲含有Percoll液的細胞經(jīng)2次洗滌后可供培養(yǎng)或檢測用。

Percoll細胞分離液的優(yōu)點

Percoll滲透性低、不穿透細胞、密度高、無毒害，是目前較理想的介質(zhì)。Percoll密度梯度離心已被多次成功地用于動物細胞及其細胞器的分離，純化了包括人血液細胞、骨髓細胞、紅血球細胞、白血球細胞、淋巴細胞、肝細胞等在內(nèi)的十余種動物細胞。

Percoll細胞分離液注意事項：

1、Percoll細胞分離液在儲存及孵育過程中避免將實際保留在強光中。

2、試劑瓶蓋需蓋緊，防止蒸發(fā)和污染。

Percoll分離液的配置與使用方法